产品目录

BalbNGS ChipTag酶具有打断双链DNA以及与抗体结合的活性。基于它的功能，我们将其应用于蛋白质-DNA互作研究的CUT&Tag。CUT&Tag是蛋白质-DNA互作关系研究的新方法，相较于传统的ChIP-Seq具有以下优点：省时高效，所需的细胞量少，背景信号低，可重复性好等，甚至可用于单细胞水平测序。CUT&Tag是研究体内蛋白与染色质DNA互相作用的有力工具，对基因调控、表观遗传等研究具有重大意义。

• 转座复合体构建（ChipTag转座体）
  
  • 冻干粉溶解
    单链ME、单链adapter1、单链adapter2的冻干粉，高速离心1min，分别加入退火Annealing Buffer溶解，溶解浓度均为100μM。涡旋混匀，保证接头充分溶解。
    
  • 制备两种接头
    ME和adapter1等体积混合、ME和adapter2等体积混合，PCR仪慢速降温退火，得到浓度均为50μmol的接头1和接头2。
    PCR设置为：95℃ 3min；95℃到25℃，45min；4℃ Hold.
    
  • 复合体制备
    将接头1和接头2等体积混合，得到混合接头；酶与接头吹打混合均匀，室温孵育1h，即可。通常酶与接头混合的摩尔比例为1∶1，亦可根据需要提高接头的孵育比例。
    如果酶与接头摩尔比例1∶1的话，如下配置：
    

    双链接头混合物（50pmol/μL）	1μL
    ChipTag pAG-Transposase(6.5pmol/μL)	7.7μL

• CUT&Tag实验测试
  使用80000个细胞进行CUT&Tag实验，使用的二抗为山羊抗，如下图所示，获得的文库产量比pA-Tn5的多，使用pAG-Tn5代替pA-Tn5，可降低实验对二抗的要求。
  
  Lane B：阴性对照（不加一抗）；
  Lane C：pA-Tn5 CUT&Tag扩增产物；
  Lane D：pAG-Tn5 CUT&Tag扩增产物；
  MK：DNA Marker。

• Adaptor1：5'TCGTCGGCAGCGTCAGATGTGTATAAGAGACAG3'
  
• Adaptor2：5'GTCTCGTGGGCTCGGAGATGTGTATAAGAGACAG3'
  
• ME：5'-pCTGTCTCTTATACACATCT-3'